支持與應(yīng)用
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【應(yīng)用分享】動(dòng)物性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定
發(fā)布時(shí)間：
2024-09-13
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β-受體激動(dòng)劑
β-受體是一種腎上腺受體，其與相應(yīng)遞質(zhì)結(jié)合導(dǎo)致心臟興奮、血管和支氣管擴(kuò)張及代謝變化（糖酵解和脂肪分解）。β-受體激動(dòng)劑的全稱為腎上腺素β受體激動(dòng)劑，可分為非選擇性的β-受體激動(dòng)劑（如異丙腎上腺素）、選擇性心臟β1-受體激動(dòng)劑（如多巴酚丁胺）與選擇性β2-受體激動(dòng)劑（如沙丁胺醇）三大類。
一些β2-受體激動(dòng)劑可以促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)合成，加速脂肪的轉(zhuǎn)化和分解。因此，常被不法分子添加入飼料中以提高瘦肉率，俗稱“瘦肉精”。當(dāng)人食用了瘦肉精含量過多的肉類時(shí)，會(huì)產(chǎn)生異常生理反應(yīng)的中毒現(xiàn)象。因此，對(duì)動(dòng)物源性食品及其他食品中的β-受體進(jìn)行含量檢測是很有必要的。
本次實(shí)驗(yàn)參考《GB 31658.22-2022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，使用RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm色譜柱測定豬肉、牛肉與豬肝中β-受體激動(dòng)劑的殘留量。
1.溶液配制
（1）乙酸銨溶液(0.2 moL/L)：稱取15.4 g乙酸銨（精確至0.001 g），加水溶解并定容至1000 mL，用乙酸調(diào)pH至5.2。
（2）高氯酸溶液(0.1 moL/L)：移取高氯酸8.7mL，用水稀釋至1000 mL。
（3）氫氧化鈉溶液(10 moL/L)：稱取40 g氫氧化鈉，用適量水溶解，冷卻后，用水稀釋至1000 mL。
（4）2%甲酸水溶液：移取甲酸2 mL，用水稀釋定容至100 mL。
（5）5%氨化甲醇溶液：移取5 mL氨水置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。
（6）0.1%甲酸乙腈溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀釋定容至100 mL。
（7）0.1%甲酸溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀釋定容至100 mL。
（8）甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90，V/V)：移取甲醇10 mL和0.1%甲酸溶液90 mL，混勻。
（9）混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(10 mg/L)：精確移取100 μL 1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，-18 ℃保存6個(gè)月。
（10）混合內(nèi)標(biāo)工作液(10 mg/L)：精確移取100 μL 1 mg/mL的混合內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，-18 ℃保存6個(gè)月。
2.酶解與提取
稱取稱取試樣2 g(準(zhǔn)確至0.05 g)于50 mL離心管內(nèi)，加0.22 mol/L乙酸銨緩沖溶液6 mL，β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40 μL，渦旋混勻，37 ℃避光水浴震蕩16 h，放置至室溫，備用。
3.萃取、凈化與濃縮
取備用液，加100 ng/mL內(nèi)標(biāo)工作液100 μL，渦旋混勻，8000 r/min離心8 min，取上清液加0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，渦旋混勻，用高氯酸調(diào)pH至1.0±0.2，8000 r/min離心8 min后，將上清液用每升10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至10±0.5。加乙酸乙酯15 mL，中速振蕩5 min，5000 r/min離心5 min，取上層有機(jī)相，下層水相中加入叔丁基甲醚10 mL，中速振蕩5 min，5000 r/min離心5 min，取上層有機(jī)相，合并，50 ℃下氮?dú)獯蹈?，?%甲酸溶液5 mL溶解，備用。
4.凈化
SPE柱：MCX 60 mg/3 mL
活化：3 mL甲醇，3 mL 2%甲酸溶液，棄去；
上樣：將備用液加入柱中；
淋洗：用3 mL 2%甲酸溶液，3 mL甲醇棄去，抽干；
洗脫：3 mL 5%氨化甲醇洗脫，收集于15 mL離心管中；
濃縮：將收集液在50℃氮?dú)獯蹈?/span>
復(fù)溶：甲醇-0.1%甲酸溶液（10+90，V/V)0.5 mL 復(fù)溶，過0.22 μm微孔濾膜，HPLC-MS/MS檢測
5.加標(biāo)
加標(biāo)水平：0.01 mL 0.1 ppm混標(biāo)加到2 g樣品，加標(biāo)水平為0.5 μg/kg，最終機(jī)度數(shù)為 2 ng/mL 。
加標(biāo)水平：0.025 mL 0.1 ppm混標(biāo)加到2 g樣品，加標(biāo)水平為1.25 μg/kg，最終機(jī)度數(shù)為5 ng/mL 。
加標(biāo)水平：0.02 mL 1 ppm混標(biāo)加到2 g樣品，加標(biāo)水平為10 μg/kg，最終機(jī)度數(shù)為 40 ng/mL 。
6.色譜條件
（1） UPLC條件
色譜柱：RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm
流動(dòng)相：A—0.1%甲酸水溶液 B—0.1%甲酸乙腈溶液
柱溫：30 ℃；
流速：0.3 mL/min；
進(jìn)樣體積：2 µL
梯度洗脫程序：見表1
表1 UPLC梯度洗脫程序
（2）質(zhì)譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI）；
掃描方式：正離子掃描；
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式；
離子噴霧電壓：5500 V；
離子源溫度：500 ℃；
氣簾氣（CUR）：10 psi；
霧化氣（GS1）：55 psi；
輔助氣（GS2）：50 psi。
液質(zhì)儀器型號(hào)：AB Sciex TRIPLE QUAD 4500
其他質(zhì)譜參數(shù)見表2
表2 多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）參數(shù)
7.結(jié)果
圖 1 β-受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)品2 ng/mL圖譜
圖 2 β-受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)品5 ng/mL圖譜
圖 3 β-受體激動(dòng)劑標(biāo)準(zhǔn)品50 ng/mL圖譜
圖 4 豬肉樣圖譜
圖 5 豬肉樣加標(biāo)0.5 μg/kg 圖譜
圖 6 豬肉樣加標(biāo)1.25 μg/kg 圖譜
圖 7 豬肉樣加標(biāo)10 μg/kg 圖譜
圖 8 牛肉樣圖譜
圖 9 牛肉樣加標(biāo)0.5 μg/kg 圖譜
圖 10 牛肉樣加標(biāo)1.25 μg/kg 圖譜
圖 11 牛肉樣加標(biāo)10 μg/kg 圖譜
圖 12 豬肝樣圖譜
圖 13 豬肝樣加標(biāo)0.5 μg/kg 圖譜
圖 14 豬肝樣加標(biāo)1.25 μg/kg 圖譜
圖 15 豬肝樣加標(biāo)10 μg/kg 圖譜
表 3 加標(biāo)回收率表
8.產(chǎn)品信息 RD-Phenyl
采用獨(dú)特的鍵合技術(shù)在硅膠上鍵合苯基而成的色譜柱。該色譜柱具有高的表面覆蓋率和完全雙封尾的特性，與直鏈烷烴鍵合而成的反相色譜柱相比，苯基柱具有不同的選擇性，或者可以說是互補(bǔ)的選擇性，對(duì)芳香族化合物、極性化合物和難以分離的藥物具有優(yōu)良的分離效果。
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SPE-MCX
混合型陽離子（MCX）交換固相萃取小柱，對(duì)堿性化合物具有高的選擇性和靈敏度，基質(zhì)基質(zhì)為聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物?；|(zhì)指標(biāo)：離子交換和反相，而且保留作用發(fā)生在一種潔凈、穩(wěn)定、高表面積、pH 0-14范圍內(nèi)穩(wěn)定的有機(jī)共聚物上?？捎脕矸蛛x塑料制品，食品或生物基質(zhì)（如血漿，尿液,膽汁及組織勻漿）中的堿性化合物，如苯丙胺，奶粉及撲爾敏，苯環(huán)利定等。
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