支持與應(yīng)用
支持與應(yīng)用
香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的測定
發(fā)布時間：
2019-02-14
1、適用范圍
適用于奶粉、蛋白粉中香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素的檢測。
2、溶液的配置
1）標準儲備液：分別精確稱取香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素10mg，分別用乙腈溶解并定容到10mL，濃度為1000mg/L。
2）20%甲醇：移取20mL的甲醇，用水定容至100mL。
3）5%乙酸甲醇：移取5mL乙酸，用甲醇定容至100mL。
4）50%乙腈：移取50mL的乙腈，用水定容至100mL。
3、提取步驟
奶粉
1） 移取1g樣品，加入10mL的水，振蕩，超聲10min，離心10min（8000r/min），吸取上清液；
2） 再加入10mL水，振蕩，超聲10min，離心10min（8000r/min），吸取上清液；
3） 重復2）的過程，合并所有上清液，混勻，再次離心2min,待凈化。
蛋白粉
移取0.5g樣品，加入10mL的水振蕩，8000rpm下離心，取澄清液，再重復2次，總計30mL水提取，待凈化。
4、SPE凈化步驟
SPE柱：月旭Welchrom?P-SAX規(guī)格：150 mg/6mL。
活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，棄去；
上樣：待凈化液15mL上樣，控制流速，不宜過快，棄去；
淋洗：6mL20%甲醇水淋洗，棄去。
洗脫：15mL5%乙酸甲醇洗脫，收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，并抽干小柱。
復溶：洗脫液在45℃下減壓蒸干，用50%乙腈定容至1mL。過0.22μm濾膜，上HPLC檢測。
5、色譜條件
色譜柱：月旭Ultimate?XB-C18 4.6×250mm,5μm
流動相：A-0.1%磷酸溶液，B-甲醇（A/B=70/30等度洗脫）
流速：1.0mL/min
柱溫：30℃
進樣量：20μL
檢測波長：280nm
6、色譜圖或者加標回收率結(jié)果
奶粉對照香蘭素20mg/L、甲基香蘭素5mg/L、乙基香蘭素10mg/L圖譜
圖2奶粉粉樣過柱圖譜
圖3奶粉樣加標香蘭素20mg/L、甲基香蘭素5mg/L、乙基香蘭素10mg/L圖譜
圖4.蛋白粉對照香蘭素100mg/L、甲基香蘭素5mg/L、乙基香蘭素15mg/L圖譜
圖5蛋白粉樣過柱圖譜
圖6蛋白粉樣加標香蘭素400mg/kg、甲基香蘭素20mg/kg、乙基香蘭素60mg/kg圖譜
表1.奶粉香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素過P-SAX小柱加標回收表
表2.蛋白粉香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素過P-SAX小柱加標回收表
7、相關(guān)產(chǎn)品信息
